菌落總數(shù)測定中的注意事項

1、在GB 4789.2的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只包括一群在平板計數(shù)瓊脂上生長發(fā)育的嗜中溫需氧菌或兼性厭氧菌的菌落總數(shù)。

2、根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求和對樣品污染情況的估計，選擇2~3個稀釋度。加入樣品時要注意外來的污染。

3、為防止細菌增殖及產(chǎn)生片狀菌落，在加入樣液后，應(yīng)在15min內(nèi)傾注培養(yǎng)基。檢樣與培養(yǎng)基混勻時，可先向一個方向旋轉(zhuǎn)，然后再向相反方向旋轉(zhuǎn)。旋轉(zhuǎn)中應(yīng)防止混合物濺到皿邊的上方。

4、培養(yǎng)基傾注的溫度與厚度是實驗正確與否的關(guān)鍵。（傾注的溫度：一般水浴和傾注溫度在46±1℃，溫度過高會造成已受損傷的菌細胞死亡，過低會導(dǎo)致瓊脂發(fā)生輕微凝固。厚度：直徑9cm的平皿一般要求15~20mL培養(yǎng)基，若培養(yǎng)基太薄，在培養(yǎng)過程中可能因水分蒸發(fā)而影響細菌的生長）。培養(yǎng)基凝固后，應(yīng)在盡快將平皿翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)，保持瓊脂表面干燥，盡量避免菌落蔓延生長，影響計數(shù)。

5、檢驗過程中還應(yīng)該用稀釋液做空白對照，用以判定稀釋液、培養(yǎng)基、平皿或吸管可能存在的污染。同時，檢驗過程中應(yīng)在工作臺上打開一塊空白的平板計數(shù)瓊脂，其暴露時間應(yīng)與檢驗時間相當(dāng)，以了解檢樣在檢驗過程中有無受到來自空氣的污染。

6、每種不同樣品中的細菌都有一定的生理特性，培養(yǎng)時應(yīng)用不同的營養(yǎng)條件及生理條件可能得出不同的結(jié)果，因而應(yīng)根據(jù)檢測標(biāo)準(zhǔn)的要求選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。

食品：36±１℃，48±2h 。

飲用水：36±１℃，48±2h 。

水產(chǎn)品（指原生態(tài)、未加工的水產(chǎn)品）：30±１℃，72±3h。(36℃培養(yǎng)和30℃培養(yǎng)結(jié)果差別較大，同樣水產(chǎn)品48h結(jié)果和72h也有差別。

7、有時檢樣的稀釋液中往往帶有食品顆粒（如奶粉、堅果），在這種情況下，為避免與細菌菌落混淆，可作一檢樣對照將稀釋液與PCA混合，不經(jīng)培養(yǎng)，置4℃環(huán)境放置，在計數(shù)時用于對照。

另外也可以在已熔化而保溫在46±1℃水浴內(nèi)的平板計數(shù)瓊脂中，按100ml加1ml 0.5%氯化三苯四氮唑（TTC）水溶液，培養(yǎng)后食品顆粒不變色，細菌為紅色。

菌落計數(shù)注意事項

1、如果高稀釋度平板上的菌落數(shù)比低稀釋度平板上的菌落數(shù)高，則說明檢驗過程中可能出現(xiàn)差錯或樣品中含抑菌物質(zhì)，這樣的結(jié)果不可用于結(jié)果報告。

2、如果平板上出現(xiàn)鏈狀菌落，菌落間沒有明顯的界限，這可能是瓊脂與檢樣混勻時，一個細菌塊被分散所造成的。一條鏈作為一個菌落計。若培養(yǎng)過程中遭遇昆蟲侵入，在昆蟲爬行過的地方也會出現(xiàn)鏈狀菌落，也不應(yīng)分開計數(shù)。

3、如果平板上菌落太多，不能計數(shù)時，不建議采用多不可計作報告。可以在最高稀釋度平板上任意選取2個1cm²的面積，計算菌落數(shù)，除2求出每cm²面積內(nèi)平均菌落數(shù)，乘以63.6(皿底面積cm²數(shù))。

4、如果檢樣是微生物類制劑（酸牛奶、酵母制酸性飲料等），在進行菌落計數(shù)時應(yīng)將有關(guān)微生物（乳酸菌、酵母菌）排除，不可并入檢樣的菌落總數(shù)內(nèi)作報告。 每個樣品從開始稀釋到傾注最后一個平板的時間不得超過15min,目的是為了使菌落能在平板上均勻分布，否則，時間放長了，樣液可能由于干燥而貼在平板上，傾注瓊脂后不易搖開，容易產(chǎn)生片狀菌落，影響菌落計數(shù)。另外，瓊脂凝固后不要在室溫長時間放置，應(yīng)及時將平皿倒置培養(yǎng)，可避免菌落的蔓延生長。

結(jié)果計算注意事項

1、若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi),計算兩個平板菌落數(shù)的平均值,再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),作為每g(mL)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。

2、若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜技術(shù)范圍內(nèi)時，按式（1）計算

N = ∑C/(n1 +0.1n2)d ……………………(1)式中:

N ———樣品中菌落數(shù);

∑C———平板(含適宜范圍菌落數(shù)的平板)菌落數(shù)之和;

n1 ———稀釋度(低稀釋倍數(shù))平板個數(shù);

n2 ———第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))平板個數(shù);

d ———稀釋因子(稀釋度)。

N = ∑C/(n1 +0.1n2)d = (232+244+33+35)/[2+ (0.1×2)]×10-2 = 544/0.022=24727

表示為25000或2.5×104。

3、若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFU,則對稀釋度最高的平板進行計數(shù),其他平板可記錄為多不可計,結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。

4、若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU,則應(yīng)按稀釋度低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。

5、若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1乘以低稀釋倍數(shù)計算。

6、若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30CFU~300CFU 之間,其中一部分小于30CFU 或大于300CFU 時,則以接近30CFU 或300CFU 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。

菌落總數(shù)的報告

1、菌落數(shù)小于100CFU 時,按“四舍五入"原則修約,以整數(shù)報告。

2、菌落數(shù)大于或等于100CFU 時,第3位數(shù)字采用“四舍五入"原則修約后,取前2位數(shù)字,后面用0代替位數(shù);也可用10的指數(shù)形式來表示,按“四舍五入"原則修約后,采用兩位有效數(shù)字。

3、若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù),則報告菌落蔓延。

4、若空白對照上有菌落生長,則此次檢測結(jié)果無效。

5、稱重取樣以CFU/g為單位報告,體積取樣以CFU/mL為單位報告。